本发明公开了一种适用于间充质干细胞无血清培养的方法，该方法是在基础培养基中添加刺激药物凝血酶，刺激间充质干细胞自身分泌内源性纤连蛋白。本发明是一种简便、成本低且安全性高的方法，有效解决了无血清培养间充质干细胞贴壁的问题，同时还能明显的促进间充质干细胞在无血清培养基中增殖。适用于临床研究级的间充质干细胞在无血清中培养扩增。