本发明公开了幽门螺杆菌活菌的定量测定、药敏测定试剂盒及测定方法，该方法采用活的幽门螺杆菌作为待测样本，利用活的幽门螺杆菌能够产生尿素酶这一特性，借助幽门螺杆菌菌落计数标准方法（CFU/ml，即每ml菌液中的细菌个体数量，菌落数标准曲线）能够快速准确读取幽门螺杆菌的数量，检测结果准确、灵敏、可信度高，解决了现有幽门螺杆菌临床微生物学鉴定因培养难，操作繁杂的计数难题，并且本发明扩展的药敏测定试剂盒和制备方法，能够同时进行多种药敏试验，临床医生能快速方便筛选出合适的抗幽门螺杆菌药物，省时省力，节约成本，为临床科学治疗提供了有益的技术解决方法。