本发明公开了一种大岛樱成年优良单株‘小乔’樱的高效离体植株再生方法。本发明通过基本培养基设置、不同激素成份及浓度水平配比优化，以成年优株当年生新梢为外植体，经腋芽诱导、腋芽增殖和生根培养，形成完整植株，移栽到基质后，得到生长整齐、表型一致的健壮苗木。本发明具有外植体的腋芽速度快；诱导率高、达100％；增殖系数大、达4.5以上，增殖芽伸长生长快，培养15d芽高达3～4cm；生根率可达100％，每株平均根数5条以上；组培生根苗健壮、移栽成活率高。在实际生产应用中可进行周年规模化快速育苗，生产出健壮、整齐一致的‘小乔’樱幼苗，应用前景广阔。