本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种中大型植物外植体的灭菌方法。所述灭菌方法包括：浸泡步骤：将外植体在乙醇溶液中进行浸泡处理，得到浸泡后的外植体；灼烧步骤：将所述浸泡后的外植体进行灼烧处理，得到灭菌后的外植体。本发明无需采用次氯酸钠溶液、升汞溶液等对外植体进行消毒，无需对大量蒸馏水进行高压灭菌，所以操作简单、节省试剂、成本低廉、对环境友好，使用范围广泛，应用价值高。