本发明涉及一种利用环介导等温扩增技术快速检测罗非鱼无乳链球菌的试剂盒，可用于鱼体及养殖水体中无乳链球菌的快速检测和实时监测。它公开了用于无乳链球菌LAMP检测的两对特异性引物，以及所述用途检测的试剂盒，所述试剂包括无乳链球菌基因组提取试剂，LAMP反应液，该反应液包括10×LAMPBuffer(200mMTris-Hcl，pH8.8;100mM氯化钾；100mM硫酸铵；20mM硫酸镁和1%TritonX-100)、BstDNA聚合酶、dNTP、内引物GBS-F3及GBS-B3，外引物GBS-FIP及GBS-BIP、甜菜碱、超纯水，荧光染料。本发明具有检测时间短、操作简单、结果明显、灵敏度高、特异性强、对人和环境安全等特点。