本发明提供了一种无血清干细胞培养基，包括基础培养基和添加在该基础培养基中的补充因子，补充因子包括亚硒酸钠、转铁蛋白、牛血清白蛋白、胰岛素、纤粘连蛋白和氢化可的松。采用本发明的上述无血清干细胞培养基，其相对现有技术的血清培养基，可以避免血清批次间的质量差异，提高细胞培养和试验结果的重复性；并避免血清所带来的外源性污染及血清组分的细胞毒性作用。并且其自身成分相对明确、质量一致且蛋白含量低，有利于提高细胞产品生产的稳定性并易于纯化。同时，在上述几种特定搭配维持干细胞增殖和性状程度后，可通过延长细胞的GI期或迫使细胞处于G0期而较长时间的维持细胞高密度培养，能更好地保持其干细胞特性。