本发明公开了一种重组乳铁蛋白二肽、表达载体及其应用。所述重组乳铁蛋白二肽的碱基序列如SEQ ID No.2所示，将包含有该重组乳铁蛋白二肽的表达载体pPICZαA-Lfchimera经限制性内切酶Sac I线性化后经电击转化法转化到毕赤酵母SMD1168中，可成功获得表达。经平板溶菌圈法检测，表达产物具有明显的抑菌活性，进而将其作为绿色添加剂应用于动物饲料中，具有替代抗生素药物的前景。