本发明属于植物细胞工程技术领域，五月瓜藤种苗的培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导、丛生芽诱导增殖、生根培养及移栽；采用本发明生产五月瓜藤种苗的技术方案，其产生的有益效果是：（1）增殖率高，生物产量大，培养周期短；（2）组培苗质量好，种苗健壮，栽培成活率高；本发明利用通过预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导、丛生芽诱导增殖和生根培养及移栽的方法对五月瓜藤种苗进行培育相对于其它培养方式具有扩繁效率高、培养时间短、转接方便；种苗健壮、栽培成活率高及成本低，适合五月瓜藤种苗规模化培育生产。