一种滇桂石斛组织培养繁育方法，包括如下步骤：(1)取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽。采用本发明所述的培养方法得到的滇桂石斛丛生芽增殖系数达到25-30倍，能够在短时间内提供成活率高的滇桂石斛优质种苗，有效解决滇桂石斛的规模化育苗问题。