本发明涉及制药领域，提供了酶法制备阿莫西林中残留蛋白质的检测方法，包括：取青霉素G酰基转移酶标准品，用pH值7.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液稀释得标准品溶液；取供试品，精密称定并置于量瓶中，加入pH值7.0的0.05mol/L的磷酸盐缓冲液，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液至供试品溶解至溶液澄清，再用pH值7.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液稀释得供试品溶液；分别精密量取上述溶液各100μL注入高效液相色谱仪中，记录峰面积，以外标法测量残留蛋白的含量。本发明方法可以有效地检测阿莫西林产品中残留蛋白的含量，从而可以有效地检测出产品的质量，提高了药品的用药安全。