一种氨氧化细菌固定式生物活性填料、制备及应用，属于水处理技术领域。生物活性填料由载体和负载有氨氧化细菌的包埋体组成，填料固定于预制框架上构成固定式生物活性填料；载体由多层聚乙烯醇无纺布和一层纺织物缝制而成；包埋体由包埋液经硼酸交联固定而成；包埋液由氨氧化细菌浓缩液和聚乙烯醇溶液混合而成。将载体浸泡于包埋液中，通过硼酸二次交联，无纺布与包埋体牢固的结合在一起，包埋体透过纺织物网孔形成整体铆固结构，包埋体不易脱落，纺织物良好的抗拉性能提高了生物活性填料的整体稳定性。本发明所制备的氨氧化细菌固定式生物活性填料，不仅解决了氨氧化细菌优势建立困难、易流失等问题，而且提高了反应器处理能力，具有良好的应用前景。