本发明提供血清中葡萄糖的光电化学测定方法。该方法通过制备水溶性半导体硫化物(组成通式为ES)纳米材料敏化的氧化镍纳米材料修饰电极，该电极具有较好的光生电荷传输效率。利用层层组装法将葡萄糖氧化酶固定到半导体硫化物敏化的氧化镍电极表面，葡萄糖氧化酶的量可以通过组装层数精确控制。固定了葡萄糖氧化酶的电极对溶液中的葡萄糖具有灵敏的光电化学响应。并且，对葡萄糖的测定具有很好的选择性。本方法解决了现有光电化学测定葡萄糖选择性差的弊端，对血清中葡萄糖的测定具有较好效果。