本发明公开了一种检测气溶胶中口蹄疫病毒的方法：(1)采集气溶胶样本；(2)提取气溶胶样本中病毒的cDNA；(3)检测：进行PCR扩增；(4)建立标准曲线和溶解曲线：建立阳性标准质粒的标准曲线，以及扩增体系的溶解曲线；(5)判断气溶胶样本中是否含有口蹄疫病毒。本发明还公开了特异性引物(如SEQ？ID？NO.1～8所示)以及试剂盒(由特异性引物、RT反应缓冲液、AMV反转录酶、Premix？Ex？Taq^TM？II、标准阳性质粒、无RNase的水组成)。本发明的检测气溶胶中口蹄疫病毒的方法及试剂盒既可用于养殖场气溶胶的口蹄疫病毒检测和血清型分型，也可用于临床样本的直接检测，还可用于科学研究等非疾病的诊断。