本发明公开了一种有益微生物无抗生物饲料及其制备方法，分别二级发酵培养制备嗜酸乳杆菌菌液、植物乳杆菌菌液、酿酒酵母菌液和地衣芽孢杆菌菌液；然后，将地衣芽孢杆菌菌液与棉籽粕混合，进行好氧发酵；再将发酵棉籽粕、玉米粉、啤酒渣、预混料混合均匀，并加入由嗜酸乳杆菌液、植物乳杆菌菌液和酿酒酵母菌液组成的复合菌液，混合均匀，恒温发酵，即得。本发明的无抗生物饲料，不添加抗生素药物，有益微生物含量高，具有很好诱食性，适口性好，增加动物的采食量，营养消化吸收率高，促进动物生长，提高动物健康水平，改善动物机体免疫抗病力。应用本发明于无抗畜禽产品的养殖中，可降低养殖成本，提高经济效益，推动养殖业的健康发展。