一种角膜板层材料的制备方法，本发明是将哺乳动物眼球的角膜-巩膜复合体通过脱细胞处理、羊膜上皮干细胞培养、TSP-1诱导分泌以及脱细胞角膜基质与羊膜上皮干细胞共培养、定型与包装灭菌等步骤制备；所获得角膜板层移植材料实现了生物相容性、稳定性、透明度、力学强度、生物活性五者间的提升与平衡；最大限度地保留了角膜胶原分子和板层结构的完整，比传统方法制备的脱细胞角膜基质拉伸强度大，具有接近于正常角膜的含水率与透明度；并富集了多种细胞生长因子和TSP-1，具有特异地抗炎和抗血管化的作用，极大地增强了角膜板层材料的生物活性，可以广泛用于复杂的眼表缺损的修复，如炎症和血管化长入的角膜溃疡等。