本发明涉及的软骨损伤治疗剂的制造方法包含以下工序:在含有FGF、PDGF、TGF-β、HGF、EGF、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸的无血清培养基A中，使间充质干细胞增殖的增殖工序；将上述增殖工序后的间充质干细胞、等张保存剂和细胞保护剂混合的混合工序。通过该制造方法提供一种很好地使软骨组织再生的软骨损伤治疗剂。