本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及胰岛样细胞的培养液及培养方法。本发明提供的胰岛样细胞培养液，包括基础培养液、转铁蛋白、牛血清白蛋白、纤粘连蛋白、硒酸、孕酮、丙酮酸钠、胰岛素和PDX-1；在原代培养中，细胞生长良好，细胞贴壁迅速、能够很好的分离胰岛样细胞与其他胰腺细胞。在此基础上添加碱性成纤维生长因子和表皮生长因子用于传代培养，细胞增殖旺盛，且具有分化功能的胰岛干细胞数量较多。经传代6代，细胞仍呈对数增殖，且细胞数量扩增了613倍。