本发明公开了一种细胞培养基，原料配方为：DMEM/High Glucose（DMEM高糖培养基）33.33ml；HAM’S/F-12培养基66.67ml；植物源重组人血清白蛋白3～5mg/mL；青霉素100U/ml；链霉素100μg/ml；两性霉素B2.5μg/mL；氢化可的松0.2～0.5μg/ml；胰岛素3～6μg/ml；霍乱毒素B6～10ng/ml；人表皮生长因子EGF9～12ng/ml；腺嘌呤22～25μg/ml；Y-276327～9μmol/L。所述细胞培养基可以用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞。本发明改进了培养基，用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞时，能更好地促进原代肿瘤细胞的生长，获得更高比例的人肿瘤干细胞。