本发明公开了一种脐带血来源的CIK细胞的制备方法。该方法采用CD3单克隆抗体激活细胞，增强细胞的刺激强度，从而提高细胞的体外扩增能力，在细胞培养基中加入干细胞生长因子和Flt3-L可以有效促进脐带血中的造血细胞向免疫细胞诱导和增殖。该方法解决了CIK细胞增殖能力差、细胞活性低的问题，制备出的CIK细胞具有增殖能力强，杀瘤活性高的特点。