本发明提供一种用于将胚胎干细胞诱导为心肌细胞的培养基，该培养基的化学成分明确，所述培养基为化学成分明确的液体培养基，所述培养基包括基础培养基RPMI-1640；所述培养基还包括1～3mg/L的L-肉毒碱、0.5～2mg/L的乙醇胺、10～20mg/L的腐胺、0.01～0.02mg/L的亚硒酸钠、0.5～2mg/L的亚油酸、3～6mg/L的转铁蛋白、50-200mg/L的维生素C和/或维生素C磷酸镁盐、50-500μM的N乙酰半胱氨酸。本发明还提供了本发明所述的培养基的制备方法和使用方法。本发明中培养基配方的各组分明确，成本低廉，非常有利于大规模的心肌细胞制备和临床应用。