本发明提供一种胎盘源壁蜕膜间充质干细胞分离冷冻的制备方法，本发明制备方法在胎盘采集前对产妇进行筛选，以符合条件的健康足月产妇志愿者，最终选择男婴作为采集目标，之后进行分离扩增进行规模化培养直至第三代，进行冷冻保存，对分离过程及冷冻过程的中间品进行一系列质量检测包括母源检测，冷冻后细胞复苏洗涤待用，活率无明显降低，细胞生物学功能完整。本发明获得的胎盘源壁蜕膜间充质干细胞成分单一，又拟从原料采集开始直至细胞制备完成的全过程进行临床级、统一、系统监控，以实现间充质干细胞的临床标准产品，再者壁蜕膜从起源上来自于母亲，更加适合母亲自体使用。