本发明涉及一种人间充质干细胞培养上清液冻干粉及其制备方法，所述制备方法包括以下步骤：用含有自体血清的间充质干细胞培养基培养传代人间充质干细胞；收集低传代倍数的细胞培养上清液；将所收集的上清液制备成冻干粉。本发明人间充质干细胞培养上清液冻干粉的制备方法所制备的冻干粉有效地保存了人间充质干细胞培养上清液中的各种具有生物活性的细胞因子混合物，可以有效地解决上清液保存期有限这一瓶颈，为人间充质干细胞培养上清液的产业化应用奠定了基础。