本发明提供了一种脂肪组织来源的间充质干细胞的扩增培养方法。本发明脂肪组织来源的间充质干细胞的扩增培养方法包括用脂肪干细胞培养基配制含脂肪组织来源的间充质干细胞的重悬液和将所述重悬液接种至纤维粘连蛋白包被处理的干细胞培养器中进行扩增培养的步骤。本发明脂肪组织来源的间充质干细胞的扩增培养方法采用纤维粘连蛋白包被脂肪间充质干细胞生长依附的固相支持物，利用低浓度胎牛血清和高浓度庆大霉素的协同增效筛选培养，使得脂肪组织来源的间充质干细胞在两周时间内能扩增400-500倍，且纯度高，能定向诱导分化为脂肪组织。