本发明涉及从脐带中分离和扩增间充质干细胞的方法。其包括如下步骤：对脐带组织进行消毒和清洗；将组织剪成块状，再平铺于另一细胞培养平皿中，使组织块风干直至组织贴在平皿上；使脐带组织培养在间充质干细胞专用培养基中进行培养，培养至第11-13天并进行补/换液后时清除所有脐带组织块并继续培养；此后每1-3天进行一次全换液；当平皿内的贴壁细胞融合率达到50-70%左右时，使用消化酶使贴壁细胞脱离平皿底部；离心去上清液，加入间充质干细胞专用培养基重新悬浮细胞，再接种于T25细胞培养瓶进行传代并进行扩增培养；此后每1-3天换液一次，直至融合率达到70-90%后，即得脐带间充质干细胞。本发明方法可有效用于分离和扩增间充质干细胞。