一种从骨髓中一次性同时培养获得基质干细胞与内皮祖细胞的制备方法，及其用途。该方法直接从骨髓中一次性同时培养基质干细胞和内皮祖细胞，所制备的上述两种细胞纯度高、方法简单、快速扩增获得。所制备的基质干细胞和内皮祖细胞增殖的细胞数可达到2×10⁸以上，细胞活力大于95％，满足临床上高数量级的治疗需要。