本发明涉及干细胞领域，公开了一种间充质干细胞的冻存液及冻存方法。本发明所述间充质干细胞的冻存液包括无血清培养基、DMSO、右旋糖酐-40，其中所述DMSO的浓度为3v/v％～7v/v％，按g/mL计右旋糖酐-40的浓度为1w/v％～3w/v％。本发明间充质干细胞的冻存液，冻存细胞之后活率显著提高，并保持良好的干细胞特性。本发明所述间充质干细胞的冻存方法采用本发明所述冻存液重悬细胞并调整细胞密度后冻存细胞。本发明所述间充质干细胞的冻存方法冻存的细胞复苏后不仅在存活率上有明显的提高，细胞增殖能力也优于常规的冻存方法，而且间充质干细胞的特异性表面标记也没有明显的下降，均有较高的表达率。