本发明提供了一种用诱导性多能干细胞诱导制备造血干细胞的方法，包括：获取诱导性多能干细胞和小鼠骨髓基质细胞；将诱导性多能干细胞和小鼠骨髓基质细胞于O₂体积分数1～5％条件下共培养。采用本发明的上述方法，采用小鼠骨髓基质细胞构建造血细胞微环境，将其与诱导性多能干细胞共培养，通过共培养使细胞代谢中产生细胞信号蛋白、细胞因子等，从而实现将诱导性多能干细胞诱导分化成造血干细胞；并且控制诱导的过程在低氧条件进行，可以加强细胞的自分泌能力，分泌物的量增加以后可以使上述诱导效果进一步加强，更利于细胞的分化，具有更高的细胞转化率。