本发明涉及生物技术领域，特别涉及干细胞冻存液及干细胞冻存方法。该干细胞冻存液包括DMSO、羟乙基淀粉和无血清培养基。本发明提供的干细胞冻存液可显著减少冻存液对细胞的损伤作用，从而可显著提高干细胞的活率；本发明选用无血清培养基，避免了血清带来的潜在污染。