本发明属于生物医药领域，公开了一种可溶解凝血酶纳米颗粒及其制备方法和应用。该可溶解凝血酶纳米颗粒具有核壳结构，核为凝血酶，壳为由水溶性直链淀粉-聚赖氨酸的阳离子交联形成的纳米粒子。该核壳结构有利于保持凝血酶的生物活性，在室温下稳定保存，具有缓释功能，药物作用时间长，进入体内不容易被降解，经济安全。本发明优选纳米粒子的粒径为150～250nm，可更好地保持凝血酶的生物活性，进一步提高纳米凝血酶的稳定性及缓释功能。而为了更好地提高纳米凝血酶的稳定性及缓释功能，纳米凝血酶的包封率优选为50～75%。