本发明属于细胞生物学领域，涉及肿瘤干细胞研究，具体涉及一种贴壁分选卵巢肿瘤侧群细胞的方法。本发明方法简化了卵巢肿瘤SP细胞分选过程，采用改良的孵育液，可有效的用于贴壁培养的卵巢肿瘤细胞系的SP细胞分选；不需要酶解消化过程，细胞直接在贴壁的状态下进行孵育染色，完成染色后再将细胞酶解成单细胞，在悬浮状态上机分选，可以提高分选时的细胞活性。本方法能简便、快速、有效分选得到SP细胞，可明显节省实验流程操作时间，获得的SP细胞可用作肿瘤干细胞的表面标志物，对后续的实验研究具有明显的实用价值。