本发明公开了一种肝实质细胞及其制备、鉴定与应用方法。本发明提供制备肝实质细胞的方法，包括如下步骤：1)将多潜能干细胞培养获得内胚层细胞；2)将获自步骤1)的内胚层细胞培养获得原始肠管细胞；3)将获自步骤2)的原始肠管细胞培养获得成肝细胞；其特征在于：将获自步骤2)的细胞进行传代，并转入到在含有成纤维细胞生长因子(FGF)和骨形态形成蛋白(BMP)的肝细胞诱导培养基I中培养，获得成肝细胞；4)将获自步骤3)的成肝细胞培养获得成熟的肝实质细胞。本发明还涉及根据所述方法制备的肝实质细胞。本发明制备的肝实质细胞较以往具有更高的代谢活性，制备效率高，应用前景广阔。