本发明提供了一种米伐木肽的高效液相色谱分析方法，该方法采用反相高效液相色谱法和蒸发光散射检测器，对样品进行等度洗脱，避免了使用易损害仪器的正相色谱法，洗脱程序简易，出峰峰形好，主峰与杂质峰的分离度好，能科学便捷的控制米伐木肽的纯度及含量，为该药物生产过程中的质量控制提供一个简单有效的方法。