本发明涉及一种高效扩增CD3^-CD56⁺的自然杀伤细胞培养系统的构建方法，经抗HER2单抗包被、NK细胞的活化和NK细胞的扩增，培养14天后即得CD3^-CD56⁺的自然杀伤细胞培养系统。本发明构建方法采用的抗HER2单抗在1998年已被美国FDA认证的可用于临床的药物，IL-2、IL-15和IL-21均为临床用药，原料来源广泛，成本低廉，方法简单，易于操作，扩增效率高，易于推广。