本发明公开了一种酵母多糖的分离纯化方法，以啤酒厂废酵母为原料，包括下列步骤：1）、酵母细胞壁破壁；2）、葡聚糖和甘露聚糖粗步分离；3）、酵母甘露聚糖的进一步纯化；和4）、酵母葡聚糖的进一步纯化。本发明采用纯天然酵母提取加工，产品为酵母甘露聚糖，分离纯化过程中无药物残留、无污染物，是纯天然绿色产品。