本发明提供了一种检测结核杆菌药敏性的方法和培养基，所述培养基为酸性，pH值≥4.5。将结核杆菌与药物、以及本发明所述培养基混合后进行培养，3~20天即可观察，观察方法可以是通过肉眼直接观察沉淀。利用本发明所述方法和培养基，建立的微量MIC检测判断MTB菌药敏性的方法，不需要昂贵的仪器设备，仅需肉眼判读，结果准确，既可以获得较为详细的菌株耐药数据，又可以提供简单明了的药敏判断结果，作为一种准确、快速、低成本、易于操作药敏检测方法，在临床、以及企业中药物筛选和研发过程中具有良好的推广应用前景。