本发明涉及超滤联合UPLC-MS／MS法测定人血浆中游离多西他赛浓度。本发明提供了测定多西他赛脂质微球注射后血浆中游离多西他赛浓度的方法，所述方法包括超滤(ultrafiltration，UF)步骤和超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS／MS)分析步骤。本发明在不破坏血浆中结合药-游离药平衡的前提下建立了灵敏度高、专属性强、重现性好的UF-UPLC-MS／MS方法。本发明首次建立的测定游离药物浓度的方法在准确度、精密度、专属性、稳定性、提取回收率及基质效应等方面均达到CFDA2005年颁布的《化学药物临床药代动力学研究技术指导原则》对生物样品的分析要求。