本发明提供了一类儿茶酚-O-甲基转移酶的特异性探针底物及其应用，该特异性探针底物为7,8-二羟基香豆素类化合物，其可用于不同来源哺乳动物组织及细胞中COMT酶活的测定，具体操作流程如下：选择具有7,8位羟基的香豆素类化合物作为高特异性探针底物，并借助COMT体外孵育体系开展特异性底物的COMT催化反应，通过定量检测单位时间内产物生成量来测定各生物样品及细胞中COMT酶的活性。本发明可用于不同种属、不同个体来源生物样本中COMT酶活的定量评估，以及不同来源的动物组织细胞培养液及细胞制备物中COMT酶活的定量测定，以期实现对重要药物代谢酶COMT处置药物能力的评估。