本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种用于治疗肿瘤的两亲性缀合物纳米颗粒及制备方法、应用。本发明的用于治疗肿瘤的两亲性缀合物纳米颗粒，包括由含羧基的疏水性抗肿瘤药物与含羟基的亲水性抗肿瘤药物酯化而成的两亲性缀合物。与现有技术相比，本发明的两亲性缀合物在水中可以自组装形成纳米颗粒，无需任何药物输送载体，该缀合物自身就能实现药物输送，通过肿瘤组织的通透性增强与滞留效应，该缀合物纳米颗粒可以更有效地进入肿瘤细胞，减少对正常细胞的毒副作用；在缀合物纳米颗粒进入肿瘤细胞后，经酯键降解即可释放出两种抗肿瘤药物，达到两种药物协同治疗癌症的目的。