本发明公开了一种除油菌剂的制备及该除油菌剂处理油田污水的方法，其通过对油田含油污水和含油泥土中的细菌进行富集、分离、纯化和筛选，选出了适合油田含油污水、除油效率高的除油菌，再通过组合和培养后得到高效复合除油菌剂，并将复合微生物制备成具有较高活化率的粉剂。并应用于油田高矿化度的含油污水中，首先对菌剂进行增殖培养，再在生化池中挂膜，然后进行含油废水驯化培养，最后对含油污水进行处理。该方法的生物活性高，生物膜耐冲击能力强，除油效果好，达到了高效除油的目的；菌剂的制备方法具备操作简单、成本低廉的特点，适合规模化生产应用。