本发明提供一种用于细叶百合遗传转化和种球快繁的体细胞胚离体再生的方法，其工艺步骤包括取细叶百合无菌苗叶片，接种于MS+BA1.0mg·L^-1+NAA0.5mg·L^-1中培养35天，获得非胚性愈伤组织。随后将其转于MS+BA0.5mg·L^-1+NAA1.0mg·L^-1中培养45天，获得胚性愈伤组织后转入MS+NAA0.5mg·L^-1中，调整胚性比例，而后依次交替使用这两种培养基，可获得胚性比例高、萌发率低的胚性愈伤组织培养物。最后转于MS中，每1cm³胚性愈伤组织培养物可形成超过21个体细胞胚。本发明以无菌苗为外植体，降低对百合原种的消耗；胚性愈伤组织诱导率高，保存效果好，肉眼可辨别，是遗传转化的良好受体；较以往方法，本发明建立的体细胞胚再生体系在愈伤组织诱导率和成苗系数方面分别提高了40%和3-4倍。