本发明公开了一种苦瓜离体快速繁殖的方法，通过对获取的大田栽培的苦瓜苗顶芽或腋芽作为外植体，接种于MS+6-BA的培养基中，诱导出芽后，切取诱导出的芽接种于MS+6-BA的培养基中，使芽增殖并伸长，取株高1.5cm左右的健壮的无根苗，转入1/2MS+IAA的生根培养基中，10d左右即可出现不定根，在生根培养基中培养25d左右有大量不定根产生，进行炼苗，炼苗3d后，移栽至土壤获得再生植株。本发明技术方法使苦瓜苗的繁殖速度加快，每代苦瓜苗的繁殖只需要1～2个月时间，为加快培育苦瓜新品种提供了技术支持。