本发明公开了一种半夏一步成苗的组织培养方法，它包括如下步骤：（1）取半夏块茎、珠芽、叶片和/或叶柄作为外植体，消毒，接种于培养基中，在温度为20～30℃、光照强度为1000～2000lx、光照时间5～15h/d的条件下培养；所述培养基以MS培养基为基础培养基，添加有终浓度为30～50g/L的蔗糖、1.0～2.5mg/L的6-BA和0.1～0.2mg/L的NAA；（2）培养至苗高3～8cm时，即可。本发明还公开了一种用于半夏组织培养的培养基。本发明半夏的组织培养方法可一步成苗，成苗率高，培育的半夏苗健壮，长势旺，操作简便，成本低廉。