本发明公开了一种球子蕨无菌繁殖技术，球子蕨（Onoclea sensibilis L.）为球子蕨科球子蕨属植物，中型的陆生蕨类。随着蕨类植物逐渐受到人们的关注，市场需求量日益增加，在自然条件下蕨类植物主要通过孢子和根莲进行繁殖，存在繁殖系数低、周期长等缺点，不利于球子蕨的市场化生产。目前，关于球子蕨的无菌繁殖技术尚未有相关报道，本发明以球子蕨孢子为外植体，经过孢子萌发、愈伤组织诱导、丛生芽分化及生根等过程获得了球子蕨离体再植株，建立球子蕨的无菌繁殖技术体系，以促进球子蕨的规模化生产。