本发明公开了一种能够为选育多花黑麦草优良品种提供技术参考的多花黑麦草组织培养再生体系的建立方法。本发明采用多花黑麦草成熟种子作为外植体，将多花黑麦草成熟种子清洗灭菌后接种到愈伤组织诱导培养基中培养18～22d得到愈伤组织，接着将愈伤组织转入愈伤组织继代培养基中培养18～22d，再将其转接到愈伤组织分化培养基中培养18～22d，当幼苗长至2～3cm时，将幼苗接入生根培养基中培养20～30d，通过上述方法建立了高效的多花黑麦草组织培养再生体系，为建立多花黑麦草组织高效遗传转化体系奠定基础，为选育多花黑麦草组织优良品种提供了技术参考。适合在生物技术领域推广运用。