本发明提供了一种水曲柳悬浮细胞体系的建立方法，1）以水曲柳茎段作为外植体，诱导愈伤组织，在添加激素TDZ和BA、蔗糖、琼脂的WPM固体培养基上获得愈伤组织；2）将步骤1）中得到的愈伤组织接种到添加激素BA和2,4-D、蔗糖的WPM液体培养基中，振荡培养。3）培养10-15d继带一次，连续继带培养3-5个继带，获得生长均匀、快速增殖的悬浮细胞系。本发明具有繁殖速度快、培养规模大和提供大量均匀植物细胞培养物的特点。