本发明公开了一种蟆叶秋海棠叶片离体再生体系建立的方法，该方法包括以下步骤：(1)选取外植体并进行消毒；(2)将处理后的叶片切割后，进行不定芽诱导培养；(3)高压静电场处理；(4)将叶片诱导的不定芽进行继代增殖培养；(5)对继代增殖培养后的试管苗进行生根培养；(6)扦插生根。采用该繁殖方法对蟆叶秋海棠进行组织培养，一个培养周期(51d)增殖率为243.1倍，繁殖速度快，有效解决了蟆叶秋海棠种苗繁殖的难题。