本发明公开了一种诱导三分三毛状根的方法，主要提供了通过发根农杆菌介导的三分三毛状根诱导技术。具体涉及发根农杆菌的活化、转化菌液的制备、外植体的转化、毛状根的继代培养及毛状根的PCR检测等方法。本发明通过三分三毛状根的高效诱导和规模化培养，可实现托品烷类生物碱的工厂化生产，对三分三这一珍稀药用植物资源的可持续利用具有重要意义。