本发明属农作物育种领域，公开了一种离体诱导同源四倍体青花菜的育种方法。该育种方法是以青花菜子叶期保留下胚轴0.4‐0.6cm的幼苗为外植体，将外植体接种至含秋水仙素的双层分化培养基上诱导培养45‐50h，直接诱导产生四倍体芽，进而可以快速稳定的获得同源四倍体青花菜。本发明首次采用液体培养基（添加秋水仙素）与固体培养基（不添加秋水仙素）双层诱导并结合处理青花菜子叶期保留下胚轴0.4‐0.6cm的幼苗的无性多倍化育种途径，获得四倍体青花菜新种质。其优点是诱导率高，嵌合体少，死亡率低，污染率低，并且获得的四倍体材料能通过分生增殖获得大量的四倍体植株，极大的缩短了诱导时间。