本发明公开了一种固定化好氧反硝化细菌的制备方法，其步骤：1.丝瓜络的预处理：取老熟的丝瓜剥去外皮，除去内瓤，剪成一定体积的小长方体，放在沸水中煮沸,然后在水龙头下洗涤，放在去离子水中浸泡，在烘箱中烘至恒重，于干燥器中贮存备用。2、好氧反硝化细菌的富集培养及菌悬液的制备：挑选斜面保存的好氧反硝化细菌，加入到经过高温高压灭菌的富集培养基中，得到菌液；3、以聚乙烯醇为载体，以丝瓜络为支持物制备固定化好氧反硝化细菌。聚乙烯醇和丝瓜络均来源广泛，价格低廉，机械强度高，稳定性好，提高固定化细菌的浓度，该方法工艺操作简单，生产成本低，易于在工业上应用。