本发明公开了一种甜瓜离体再生的方法。本发明所提供的一种甜瓜离体再生的方法包括下述步骤：①以甜瓜子叶为外植体，将外植体接种于芽诱导培养基进行培养，获得不定芽丛；②将步骤①获得的不定芽丛置于芽伸长培养基甲进行培养，获得不定芽；③将步骤②获得的不定芽置于生根培养基进行培养，获得甜瓜再生苗。本发明提供的甜瓜离体再生的方法，具有不定芽诱导率高，玻璃化程度低，再生周期短等优势，将该方法应用在甜瓜遗传转化中，可获得较高的转化率。